1. 介绍
布拉德福定量法是测定蛋白质含量最常用的方法之一。它利用布拉德福试剂与蛋白质反应，形成显色复合物，从而通过光密度的变化来测量样品中蛋白质的含量。
2. 原理
布拉德福试剂的主要成分是甲基绿（Coomassie Brilliant Blue G-250）和相应的磷酸酐化学品。在酸性条件下，蛋白质和试剂的磷酸酐作用，使甲基绿分子从自身的“开放”形式转变为“闭合”形式。这种过程导致甲基绿分子变得更加亲水，从而与蛋白质形成复合物。
3. 操作步骤
准备布拉德福试剂：将1升蒸馏水中加入50mg Coomassie Brilliant Blue G-250和100mL磷酸酐缓冲液（pH 3.0）。
制备标准曲线：制备不同浓度（0~2μg/μL）的BSA溶液，分别取10μL加入96孔板中，再加入200μL布拉德福试剂，混匀后，孵育15分钟后，用光谱计检测光密度值。
测定待测样品：取一定体积的待测样品加入96孔板中，加入适量的布拉德福试剂，混匀后，孵育15分钟后，用光谱计检测光密度值。
计算蛋白质含量：根据标准曲线计算出待测样品中的蛋白质含量。
4. 注意事项
1. 样品浓度应当控制在标准曲线的范围内，并进行重复测量。
2. 不要使用金属工具接触布拉德福试剂，以免影响试剂的稳定性和准确性。
3. 注意光谱计的灵敏度和波长范围，避免读数误差。
4. 确保实验环境卫生、干净，避免外源性污染。
